五磨飲合四逆散配方顆粒與傳統合煎劑的定性定量比較

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【摘要】目的:對五磨飲合四逆散配方顆粒和傳統合煎劑進行定性定量比較。方法:采用薄層層析(TLC)進行定性比較和高效液相色譜法(HPLC)測定芍藥苷的含量。結果:TLC結果顯示,配方顆粒與合煎劑的化學成分種類相似,但合煎劑的斑點比配方顆粒的斑點更明顯;HPLC研究表明,芍藥苷在0.0355~0.426mg范圍內線性關系良好(r=0.9999),平均加樣回收率為100.49%,RSD=1.07%(n=5),配方顆粒中芍藥苷含量約為合煎劑的95%。結論:傳統合煎劑與配方顆粒兩者的化學成分基本相同,但芍藥苷含量略有差異。

【關鍵詞】五磨飲合四逆散;配方顆粒;芍藥苷;HPLC;薄層層析;定性;定量

五磨飲合四逆散是五磨飲子和四逆散兩個方劑的合方。五磨飲子首見于清?汪昂《醫方集解》,由沉香、木香、檳榔、枳實、烏藥5味中藥組成,功效為破滯降逆,“治暴怒氣厥卒死”[1]。四逆散出自《傷寒論》,由柴胡、白芍、枳實、甘草組成,用于治療氣郁證,四肢厥逆[2]。五磨飲合四逆散是在這兩個方劑的基礎上加減,由沉香、烏藥、木香、枳殼、柴胡、白芍、甘草、薤白、黃連以及肉桂10味中藥組成的合方,具有行氣理氣、和表解里、疏肝理脾等功效[3]。

中藥配方顆粒是運用現代化科學技術將傳統中藥飲片分別提取、濃縮、干燥成的顆粒劑,使用時按處方劑量取各味配方顆粒,直接加熱水溶解后飲用,具有不需煎煮、方便、快捷、安全、衛生等特點,更能適應現代快節奏的生活方式和臨床應用的需要[4]。由于配方顆粒與傳統煎劑的水煎方式不同(前者為分煎,而后者為合煎),可能存在提取成分的差異。為了比較兩者之間的異同,本實驗對五磨飲合四逆散的配方顆粒與合煎劑進行了薄層層析(TLC)定性比較和芍藥苷高效液相色譜(HPLC)定量比較,F將實驗方法與結果報道如下。

1實驗材料

1.1儀器

LC-6A高效液相色譜儀(日本島津公司);BS224S電子天平(北京賽多利斯儀器系統有限公司);AS3120A超聲波清洗器;LXJ-84-01離心機(北京醫療儀器修理廠)。

1.2試藥

芍藥苷對照品購自中國藥品生物制品檢定所,批號:110736,規格:95%;中藥飲片與配方顆粒由深圳三九現代中藥有限公司提供,根據生產記錄,中藥飲片為同批次配方顆粒生產原材料;乙腈為色譜純,其他試劑為分析純。

2方法與結果

2.1薄層層析定性比較

2.1.1供試品溶液的制備

按日處方量稱取藥材,加10倍量水浸泡30min,煎煮20min,濾過;藥渣再加入10倍量水,煎煮20min,濾過;合并兩次濾液,減壓濃縮至400mL,即得合煎劑母液。量取母液50mL,用石油醚(30~60℃)萃取2次,每次25mL,分取、合并石油醚層,減壓濃縮至干。殘留物用2mL甲醇溶解即得供試液A1。石油醚萃取后的水層,揮去殘留的石油醚后,再用水飽和的正丁醇萃取2次,每次25mL,分取、合并正丁醇層,減壓濃縮至干,殘留物用2mL甲醇溶解作為供試液B1。

按日處方量取相應配方顆粒,加入400mL沸水溶解,作為配方顆粒母液。量取該母液50mL,以下按合煎劑供試液制備方法同樣操作,分別制成配方顆粒供試液A2,B2。

2.1.2TLC比較分析

分別取供試液A1和A2各100mL,點樣于同一硅膠薄層板上,以環己烷-乙酸乙酯(7∶3)為展開劑,展開約15cm后,取出,晾干,在紫外燈(265nm)觀察斑點的數量及熒光的強弱;然后噴10%硫酸乙醇液,加熱至顯色,日光下觀察斑點的數量及色澤的深淺。

另分別取供試液B1和B2各40mL,點樣于同一硅膠薄層板上,以氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)下層為展開劑,展開約15cm后,取出晾干,噴10%硫酸乙醇液,加熱至顯色。日光下觀察斑點的數量及色澤的深淺。

2.1.3結果

供試液A1和A2的TLC在紫外燈(265nm)下顯示,兩者的熒光斑點數量基本一致,但供試液A1的斑點比供試液A2的斑點更明顯;噴10%硫酸乙醇液加熱顯色后,也顯示了相同的結果;供試液B1和B2的TLC硫酸顯色后,兩者的斑點數量基本一致,但供試液B1的斑點比供試液B2的斑點更明顯。

2.2芍藥苷含量測定

2.2.1色譜條件

色譜柱:Intersil-ODS色譜柱(4.6mm×150mm,5mm);流動相:乙腈-水(15∶85);檢測波長:230nm;流速:1mL/min;柱溫:室溫。

2.2.2供試品溶液的制備精密量取“2.1”項下合煎劑母液25mL,減壓濃縮至干后,精密加入70%乙醇25mL,稱質量,超聲波震蕩20min,加溶劑補足質量,離心(4000r/min)10min,精密量取上清液5mL,定容至25mL,作為合煎劑供試品溶液。另精密量取“2.1.1”項下配方顆粒母液25mL,按合煎劑供試液制備方法同樣操作,制成配方顆粒供試品溶液。

2.2.3對照品溶液的制備

精密稱定芍藥苷對照品0.0071g,用50%甲醇配制成0.0355mg/mL的對照品溶液。

2.2.4標準曲線與線性關系考察

按“2.2.1”的色譜條件,分別精密吸取對照品溶液1、2、4、8、12mL,進樣分析,以芍藥苷的絕對進樣量為橫坐標,峰面積積分值為縱坐標繪制標準曲線;貧w方程為:

Y=1759.1X-6453.4(r=0.9999)

結果表明芍藥苷在0.0355~0.4260mg范圍的線性關系良好。

2.2.5陰性實驗

按日處方量取除白芍配方顆粒以外的其他顆粒,按“2.2.2”項下方法制得陰性對照溶液,精密吸取陰性對照溶液10mL,按“2.2.1”的色譜條件進行分析。陰性對照溶液在芍藥苷色譜峰保留時間附近未見干擾峰,說明所確定的色譜條件可以用于芍藥苷的含量測定。對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液的HPLC色譜圖見圖1。

2.2.6精密度試驗

精密吸取芍藥苷對照品溶液,重復進樣5次,每次10mL,測定峰面積,并計算其RSD為0.67%(n=6),表明儀器精密度良好。

2.2.7穩定性試驗

精密吸取芍藥苷對照品溶液10mL,間隔2h進樣1次,重復進樣5次,測定峰面積值,計算其RSD為1.34%(n=5),表明芍藥苷溶液在8h內穩定。

2.2.8重現性試驗

精密稱取同一批樣品5份,按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液,按“2.2.1”的色譜條件進行測定,計算樣品中芍藥苷含量的RSD為0.67%,表明分析方法重現性良好。

2.2.9加樣回收率試驗

精密量取已知芍藥苷含量的樣品5份,等量加入對照品,按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液,按“2.2.1”的色譜條件進行測定,計算加樣回收率,結果見表1。

2.2.10樣品含量測定

按“2.2.2”項下方法制備配方顆粒和合煎劑的供試品溶液各5份,編號為1、2、3、4、5,進樣測定,結果見表2。

2.2.11結果

配方顆粒和合煎劑中均可測定芍藥苷的含量,但前者中的含量較后者低,約為后者的95%。

3討論

五磨飲合四逆散配方顆粒和合煎劑的TLC比較結果表明,兩者的脂溶性成分(石油醚萃取液)和水溶性成分(正丁醇萃取)的種類基本相同,但合煎劑顯示斑點的色澤均較配方顆粒更明顯。

本實驗成功的建立了芍藥苷含量的HPLC測定方法。并對方法的精密度、穩定性、重現性等進行了考察,結果顯示該測定條件良好,可以用于五磨飲合四逆散配方顆粒及合煎劑中芍藥苷的含量測定。

采用所建立HPLC法分別對五磨飲合四逆散配方顆粒和合煎劑中芍藥苷的含量進行了測定和比較,結果顯示配方顆粒中芍藥苷的含量比合煎劑中的含量低,約為合煎劑中芍藥苷含量的95%。

配方顆粒是適應現代快節奏生活方式而出現的,具有使用方便、便于攜帶、衛生等優點,正逐漸為人們所接受。雖然本實驗的結果顯示,五磨飲合四逆散配方顆粒與傳統中藥合煎劑之間的化學成分種類基本相同,但存在量的差異。但也不能據此就否認配方顆粒,尚需要更多的實驗數據,特別是藥效實驗數據,才能證明兩者的優劣。

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